Ооо гк техносервис: ООО «ГК «ТЕХНОСЕРВИС»», ИНН 7719430654

Содержание

Структура и группа компаний Техносервис

Добро пожаловать в группу компаний Техносервис!

 

Наше предприятие объединяет в себе несколько компаний, ведущих самостоятельную деятельность в направлении изготовления и обслуживания техники различного применения.

 

Начав свою деятельность в 1993 году с одного-единственного предприятия по модернизации и тюнингу автомобилей российского производства, наше предприятие росло и развивало новые направления деятельности. Так, сейчас предприятия группы компаний Техносервис выпускают и обслуживают шахтную транспортную технику, лесозаготовительную технику, суда на воздушной подушке (СВП), специальное оборудование по переработке отходов, производят ремонт и техобслуживание автомобилей.

 

Вся производимая нами техника сертифицирована и оборудуется отечественными и импортными силовыми агрегатами и комплектующими, обладает высокой экологичностью, ремонтопригодностью, надежностью, а также низкой ценой, что выгодно отличает ее от импортных аналогов.

 

Наше предприятие располагает собственным конструкторским бюро, осуществляющим разработку техники в соответствии с мировыми стандартами и учетом специфических потребностей российского пользователя. На предприятии внедрена система менеджмента качества ISO 9001

 

СТРУКТУРА ГРУППЫ КОМПАНИЙ «ТЕХНОСЕРВИС»

 

В состав группы компаний входят 6 производственных предприятий:

 

ООО ТехноТОР – разработка, производство и обслуживание шахтной и лесозаготовительной техники. Производство и обслуживание судов на воздушной подушке (СВП). Мы представляем новое направление деятельности компании — разработка, производство, продажа, сервисное обслуживание, ремонт всех видов водного транспорта. Суда на воздушной подушке (СВП).

Эксклюзивные поставки силовых агрегатов Toyota, Isuzu и Hyundai непосредственно с заводов-производителей.

Мы предлагаем большой выбор силовых агрегатов, отличающиеся высокой надежностью — бензиновых и дизельных с механическими и автоматическими коробками передач фирмы TOYOTA, ISUZU и Hyundai для установки на автомобили отечественного производства. Имеется одобрение типа транспортного средства.

Официальным представителем по реализации продукции ООО Техно ТОР является компания ООО «Новые Технологии» .

 

ГК Оскар – разработка, производство и обслуживание оборудования для переработки и утилизации отходов и мусора

 

ООО Техносервис-НТ – ремонт и обслуживание автомобильной техники, проведение гостехосмотра. Мы предлагаем полный комплекс услуг по диагностике и ремонту автомобилей отечественного и зарубежного, производства, диагностика автомобилей TOYOTA, ROVER, CHERRY, ВАЗ, ГАЗ, УАЗ на дилерском оборудовании. Проводим гостехосмотр автомобилей всех марок.

 

 

Оценка условий труда с классификацией условий труда.

 

С 2017 по 2019гг. на предприятиях группы компаний «Техносервис» была произведена специальная оценка условий труда работников с классификацией условий труда. С полученными данными можно ознакомиться в приведенных таблицах 

 

✅ ООО «ГК «ТЕХНОСЕРВИС»», 🏙 Москва (OГРН 5157746062282, ИНН 7719430654, КПП 771901001) — 📄 реквизиты, 📞 контакты, ⭐ рейтинг

Последствия пандемии

В полной версии сервиса доступна вся информация по компаниям, которых коснулись последствия пандемии коронавируса: данные об ограничениях работы и о программе помощи от государства тем отраслям, которые испытывают падение спроса

Получить доступ

Краткая справка

ООО «ГК «ТЕХНОСЕРВИС»» было зарегистрировано 18 ноября 2015 (существует 6 лет) под ИНН 7719430654 и ОГРН 5157746062282. Юридический адрес 105318, Москва, Ткацкая улица, дом 17, строение 2, помещение 3/5. Руководитель КУРМАШЁВ ИВАН ВАЛЕРЬЕВИЧ. Основной вид деятельности ООО «ГК «ТЕХНОСЕРВИС»»: 46.74.2 Торговля оптовая водопроводным и отопительным оборудованием и санитарно-технической арматурой. Телефон, адрес электронной почты, адрес официального сайта и другие контактные данные ООО «ГК «ТЕХНОСЕРВИС»» отсутствуют в ЕГРЮЛ.

Информация на сайте предоставлена из официальных открытых государственных источников.

Контакты ООО «ГК «ТЕХНОСЕРВИС»»

Основной адрес

105318, Россия, Москва, Ткацкая улица, дом 17, строение 2, помещение 3/5

Зарегистрирован 18 ноября 2015

Перейти ко всем адресам


Телефоны

+7 (968).
.. показать

Электронная почта


5157746062282,телефон, юридический адрес, схема проезда, контакты

Код по ОКВЭД Наименование дополнительного вида деятельности
25.11 Производство строительных металлических конструкций, изделий и их частей
25.99 Производство прочих готовых металлических изделий, не включенных в другие группировки
33.16 Ремонт и техническое обслуживание летательных аппаратов, включая космические
43. 21 Производство электромонтажных работ
43.22 Производство санитарно-технических работ, монтаж отопительных систем и систем кондиционирования воздуха
43.29 Производство прочих строительно-монтажных работ
43.33 Работы по устройству покрытий полов и облицовке стен
45.20 Техническое обслуживание и ремонт автотранспортных средств
45.31 Торговля оптовая автомобильными деталями, узлами и принадлежностями
46.14.9 Деятельность агентов по оптовой торговле прочими видами машин и промышленным оборудованием
46. 49 Торговля оптовая прочими бытовыми товарами
46.49.33 Торговля оптовая писчебумажными и канцелярскими товарами
46.62 Торговля оптовая станками
46.63 Торговля оптовая машинами и оборудованием для добычи полезных ископаемых и строительства
46.66 Торговля оптовая прочей офисной техникой и оборудованием
46.69.2 Торговля оптовая эксплуатационными материалами и принадлежностями машин
46.69.3 Торговля оптовая подъемно-транспортными машинами и оборудованием
46. 73.3 Торговля оптовая санитарно-техническим оборудованием
46.73.6 Торговля оптовая прочими строительными материалами и изделиями
46.74 Торговля оптовая скобяными изделиями, водопроводным и отопительным оборудованием и принадлежностями
46.90
Торговля оптовая неспециализированная
47.59 Торговля розничная мебелью, осветительными приборами и прочими бытовыми изделиями в специализированных магазинах
49.4 Деятельность автомобильного грузового транспорта и услуги по перевозкам
49. 41.3 Аренда грузового автомобильного транспорта с водителем
49.42 Предоставление услуг по перевозкам
52.10 Деятельность по складированию и хранению
52.29
Деятельность вспомогательная прочая, связанная с перевозками

О компании — ООО Актив Техносервис

«Актив Техносервис» осуществляет коммерческую деятельность с 1998 года и с тех пор динамично и поступательно развивается. Основная продукция, которую «Актив Техносервис» предлагает клиентам — это: 

  • батарейки,
  • аккумуляторы,
  • зарядные устройства,
  • источники бесперебойного питания,
  • стабилизаторы,
  • фонари,
  • лампочки,

а также

  • ремонт аккумуляторных батарей и изготовление аккумуляторных сборок.

«Актив Техносервис» («Аксиома») является официальными представителями таких торговых марок как DELTA, DURACELL, ROBITON, ANSMANN и других известных брендов в Крыму.

Лучшие цены, широкий ассортимент товаров, постоянное их наличие на складе позволяет обслуживать клиентов в максимально короткие сроки. Если вы желаете сэкономить время и средства, «Актив Техносервис» поможет Вам сделать это!

Профессиональный сервисный центр «Актив Техносервис» оперативно и качественно произведет замену элементов в любой аккумуляторной батарее вашего ноутбука, электроинструмента или радиостанции. Уникальная услуга, которую Вы не найдете больше нигде! В чем преимущество? Вы не переплачиваете за доставку, аренду магазина, возможный брак и отказ от обмена, а главное сохраняете нервы, а мы в кратчайшие сроки изготовим Вам новую батарею к ноутбуку, электроинструменту. У «Актив Техносервис» лучшее оборудование и специалисты!

«Актив Техносервис»  готов доставляет товар нашим постоянным оптовым клиентам на собственном автотранспорте по городу Симферополю.

На протяжении длительного времени нас выбирают: Гостиница «Ореанда», Отель «Миндальная роща», Гостиница «Москва», Симферопольский международный аэропорт, охранные предприятия Крыма и т.д.

«Актив Техносервис» (Аксиома)

Тел./факс: +7 (3652) 51-69-63, моб +7 (978) 085-66-95

e-mail: [email protected]

Реквизиты ООО «Актив Техносервис»:
ИНН 9102003494 
КПП 910201001 
ОГРН 1149102004370 
ОКПО 00125517 

Юридический адрес 295023 Крым г. Симферополь, улица Беспалова, дом 154 
Фактический адрес 295023 Крым г. Симферополь, улица Беспалова, дом 154 

ОКАТО 35401000000 
ОКТМО 35701000001 
ОКВЭД 46.90 Торговля оптовая неспециализированная
ОКФС 16 
ОКОПФ 12300 

Банковские реквизиты ООО «Актив Техносервис»:
Расчетный счет 40702810640080000265
Корр. счет банка 30101810335100000607
Название банка РНКБ БАНК (ПАО)
БИК банка 043510607

Проверить регистрационные данные фирмы, можно на http://egrul. nalog.ru/

<

ООО Техно-Сервис Строй — Главная

Внимание! Акция от нашего партнера Buderus.

Компания «Техно-сервис Строй» оказывает услуги по следующим направлениям:

  • проектирование, строительство, ввод в эксплуатацию систем газораспределения и газопотребления
  • эксплуатация и обслуживание объектов систем газораспределения и газопотребления
  • реконструкция объектов систем газораспределения и газопотребления
  • продажа оборудования для строительства, эксплуатации и обслуживания систем газораспределения и газопотребления

Системы газоснабжения и газопотребления от «Техно-сервис Строй»

Основной объем деятельности компании «Техно-сервис Строй» — это газификация городских микрорайонов (многоквартирных жилых домов), поселков и частных домов. Эта работа ведется в рамках муниципальных и коммерческих контрактов.

Также «Техно-сервис Строй» осуществляет реконструкцию существующих сетей газораспределения и газопотребления как в жилых кварталах, поселках и коттеджах, так и на промышленных предприятиях, в том числе на таких крупнейших и известнейших, как завод «Радиодетали», Смоленский авиационный завод и многие другие.

Специалисты компании «Техно-сервис Строй» осуществляют работы по строительству газопроводов повышенной сложности. Зачастую это горизонтально направленное бурение (проколы) протяженностью до 600 м под землей за один проход с последующим выходом на поверхность и, при необходимости, последующим  проколом по маршруту трассы. Такие работы проводятся там, где невозможно вести трассу открытым способом. Наши газопроводы проходят под дном рек, под полями, лесами, болотами, под жилыми кварталами городов. Для прокладывания газопроводов мы используем наиболее качественные трубы, например Plasson, Турбопласт, фитинги ЕВРОСТАНДАРТ, самое современное котловое оборудование, надежные комплектующие.

Наши поставщики – это известнейшие мировые бренды производителей газового оборудования – как промышленного, так и бытового назначения, такие как Wolf, Viessmann, Waishaupt, Bosch, Baxi, Ariston.  Для большинства этих компаний «Техно-сервис Строй» является авторизованным сервисным центром.

«Техно-сервис Строй» как генподрядчик или субподрядчик

Когда «Техно-сервис Строй» осуществляет весь комплекс работ – от проектирования до ввода в эксплуатацию и обслуживания, а также реконструкцию и ремонтные работы, в руках наших специалистов максимум возможностей для решения самых различных, в том числе очень нетривиальных задач клиента.

«Техно-сервис Строй» ведет свои собственные проекты – от проектирования до ввода в эксплуатацию и гарантийного и сервисного обслуживания  — а также берет на себя технологически сложные и наукоемкие участки работ в проектах других организаций. Зачастую «Техно-сервис Строй» ведет совместные проекты с АО «ГАЗПРОМ» в качестве заказчика или подрядчик.

Кадровая политика компании «Техно-сервис Строй»

В нашей компании работают инженеры-проектировщики, инженеры-строители, менеджеры, технические специалисты и рабочие самого высокого уровня квалификации. Наши сотрудники регулярно проходят обучение в учебных центрах и принимают участие в семинарах производителей газового оборудования.  Каждый сотрудник на своем месте четко понимает свои задачи.

Клиентская политика компании «Техно-сервис Строй»

Нашу клиентскую политику составляют:

  • индивидуальный подход,
  • максимальное внимание к каждому проекту,
  • гибкое ценообразование,
  • полное соблюдение цен и сроков контракта.

 

Позвоните по телефону +7 (4812) 65 32 60,+7(910) 787-04-44, чтобы оставить заявку и в ближайшее время получить расчет по стоимости и срокам для Вашего объекта.

Наноматериалы | Бесплатный полнотекстовый | Нагруженные нанокуркумином UCNP для тераностики рака: физико-химические свойства, токсичность in vitro и визуализирующие исследования in vivo

Рисунок 1. Механизм образования ( a ) UCNP1-PLGA-нанокур, ( b ) UCNP2-PLGA-нанокур.

Рисунок 1. Механизм образования ( a ) UCNP1-PLGA-нанокур, ( b ) UCNP2-PLGA-нанокур.

Рисунок 2. HRSEM Изображения нанокуркумина ( A , B ) , UCNP1 ( C , D ), UCNP1-PLGA-NANOCUR ( E , F ), UCNP2 ( г , ч. ) и UCNP2-PLGA-нанокур ( и , и ).

Рисунок 2. HRSEM Изображения нанокуркумина ( A , B ) , UCNP1 ( C , D ), UCNP1-PLGA-NANOCUR ( E , F ), UCNP2 ( г , ч. ) и UCNP2-PLGA-нанокур ( и , и ).

Рисунок 3. Рентгенограммы ( a ) NaYF 4 : Yb, Er (UCNP1), нанокуркумин, UCNP1-PLGA-нанокур ( b ) NaYF 4 : Yb, Tm (UCNP2) и UCNP2-PLGA-нанокур .

Рисунок 3. Рентгенограммы ( a ) NaYF 4 : Yb, Er (UCNP1), нанокуркумин, UCNP1-PLGA-нанокур ( b ) NaYF 4 : Yb, Tm (UCNP2) и UCNP2-PLGA-нанокур .

Рисунок 4. FTIR-спектры нанокуркумина, NaYF 4 : Yb, Er и UCNP-PLGA-нанокур.

Рисунок 4. FTIR-спектры нанокуркумина, NaYF 4 : Yb, Er и UCNP-PLGA-нанокур.

Рисунок 5. ( a ) Рамановские спектры нанокуркумина, NaYF 4 :Yb,Er (UCNP1), UCNP1-PLGA-nanocur ( b ) NaYF 4 :Yb,Tm (UCNP2), UCNP2-PLGA-nanocur композиты .

Рисунок 5. ( a ) Рамановские спектры нанокуркумина, NaYF 4 :Yb,Er (UCNP1), UCNP1-PLGA-nanocur ( b ) NaYF 4 :Yb,Tm (UCNP2), UCNP2-PLGA-nanocur композиты .

Рисунок 6. ( a ) Спектры UCL UCNP1, UCNP1-PLGA и UCNP1-PLGA-nanocur, ( b ) спектры флуоресценции UCNP1, UCNP1-PLGA, ( c ) Спектры UCL UCNP2, UCNP2-PLGA и UCNP2- PLGA-nanocur ( d , e ) спектры флуоресценции UCNP2, UCNP2-PLGA и UCNP2-PLGA-nanocur соответственно.

Рисунок 6. ( a ) Спектры UCL UCNP1, UCNP1-PLGA и UCNP1-PLGA-nanocur, ( b ) спектры флуоресценции UCNP1, UCNP1-PLGA, ( c ) Спектры UCL UCNP2, UCNP2-PLGA и UCNP2- PLGA-nanocur ( d , e ) спектры флуоресценции UCNP2, UCNP2-PLGA и UCNP2-PLGA-nanocur соответственно.

Рисунок 7. Жизнеспособность клеток крысиной глиомы С6 после 48 ч инкубации с наночастицами на основе NaYF 4 :Yb,Er ( A ) и NaYF 4 :Yb,Tm ( B ).В МТТ-анализе жизнеспособность интактных клеток принимали за 100%. * p < 0,05 по сравнению с контрольными наночастицами в U-критерии Манна-Уитни (непараметрический, двусторонний).

Рисунок 7. Жизнеспособность клеток крысиной глиомы С6 после 48 ч инкубации с наночастицами на основе NaYF 4 :Yb,Er ( A ) и NaYF 4 :Yb,Tm ( B ). В МТТ-анализе жизнеспособность интактных клеток принимали за 100%. * p < 0,05 по сравнению с контрольными наночастицами в U-критерии Манна-Уитни (непараметрический, двусторонний).

Рисунок 8. Жизнеспособность клеток С6 в сфероидах после 48 ч инкубации с NaYF 4 :Yb,Er-PLGA-nanocur и NaYF 4 :Yb,Tm-PLGA-nanocur. Анализ МТС, жизнеспособность интактных клеток принимали за 100%.

Рисунок 8. Жизнеспособность клеток С6 в сфероидах после 48 ч инкубации с NaYF 4 :Yb,Er-PLGA-nanocur и NaYF 4 :Yb,Tm-PLGA-nanocur. Анализ МТС, жизнеспособность интактных клеток принимали за 100%.

Рисунок 9. Микрофотографии сфероидов крысиной глиомы C6, инкубированных с 0,4 мг/мл UCNP в течение 48 ч, линза 10×. Сфероиды представляют собой трехмерную модель клеточной культуры, аналогичную опухолям in vivo. Внешний клеточный слой поврежден в случае обработанных сфероидов ( B , C ) по сравнению с контрольным интактным сфероидом ( A ).

Рисунок 9. Микрофотографии сфероидов крысиной глиомы C6, инкубированных с 0,4 мг/мл UCNP в течение 48 ч, линза 10×. Сфероиды представляют собой трехмерную модель клеточной культуры, аналогичную опухолям in vivo.Внешний клеточный слой поврежден в случае обработанных сфероидов ( B , C ) по сравнению с контрольным интактным сфероидом ( A ).

Рисунок 10. Микрофотографии с помощью конфокальной флуоресцентной микроскопии сфероидов крысиной глиомы C6, инкубированных с 0,4 мг/мл UCNP в течение 48 ч, NaYF 4 :YbEr PLGA nanocur ( A ) и NaYF 4 :YbTm PLGA nanocur3 (900 900) окрашено йодидом пропидия (мертвые клетки, выделены красным) и кальцеином AM (живые клетки, выделены зеленым цветом), масштабная линейка составляет 100 мкм.

Рисунок 10. Микрофотографии с помощью конфокальной флуоресцентной микроскопии сфероидов крысиной глиомы C6, инкубированных с 0,4 мг/мл UCNP в течение 48 ч, NaYF 4 :YbEr PLGA nanocur ( A ) и NaYF 4 :YbTm PLGA nanocur3 (900 900) окрашено йодидом пропидия (мертвые клетки, выделены красным) и кальцеином AM (живые клетки, выделены зеленым цветом), масштабная линейка составляет 100 мкм.

Рисунок 11. Микрофотографии клеток глиомы крысы С6 в люминесцентном микроскопе с повышением частоты: концентрация UCNP 0.05 мг/мл, 30 мин инкубации. Сигнал преобразования с повышением частоты выделен красным цветом. Объектив 10×.

Рисунок 11. Микрофотографии клеток глиомы крысы С6 в люминесцентном микроскопе с повышением частоты: концентрация UCNP 0,05 мг/мл, инкубация 30 мин. Сигнал преобразования с повышением частоты выделен красным цветом. Объектив 10×.

Рисунок 12. Микрофотографии клеток глиомы крысы С6 под флуоресцентным микроскопом: концентрация UCNP 0,05 мг/мл, инкубация 30 мин. Ядра клеток отмечены красным цветом, флуоресценция нанокуркумина отмечена синим цветом.Возбуждение нанокуркумина индуцировали облучением при 488 нм. Объектив 10×.

Рисунок 12. Микрофотографии клеток глиомы крысы С6 под флуоресцентным микроскопом: концентрация UCNP 0,05 мг/мл, инкубация 30 мин. Ядра клеток отмечены красным цветом, флуоресценция нанокуркумина отмечена синим цветом. Возбуждение нанокуркумина индуцировали облучением при 488 нм. Объектив 10×.

Рисунок 13. Микрофотографии сфероидов крысиной глиомы С6, 0,4 мг/мл UCNP, инкубация 2 ч и 48 ч, конфокальная флуоресцентная микроскопия.Флуоресценция нанокуркумина показана красным, возбуждение 488 нм. Шкала бара составляет 100 мкм.

Рисунок 13. Микрофотографии сфероидов крысиной глиомы С6, 0,4 мг/мл UCNP, инкубация 2 ч и 48 ч, конфокальная флуоресцентная микроскопия. Флуоресценция нанокуркумина показана красным, возбуждение 488 нм. Шкала бара составляет 100 мкм.

Рисунок 14. Светлопольное изображение органокомплекса мыши ( слева ) и эпилюминесцентное изображение органокомплекса мыши, помеченного NaYF 4 :Yb,Tm-PLGA-nanocur ( справа ), внутривенная инъекция 0.75 мг UCNP, через 4 часа после инъекции.

Рисунок 14. Светлопольное изображение органокомплекса мыши ( слева ) и эпилюминесцентное изображение органокомплекса мыши, меченного NaYF 4 :Yb,Tm-PLGA-nanocur ( справа ), внутривенная инъекция 0,75 мг UCNP, через 4 ч после инъекция.

Рисунок 15. Светлопольное изображение органов ex vivo ( слева ) и эпилюминесцентное изображение органокомплекса мыши ( справа ).Внутривенная инъекция 0,75 мг UCNP через 4 часа после инъекции. (Верхний ряд-NaYF 4 :Yb,Er-PLGA и NaYF 4 :Yb,Tm-PLGA, нижний ряд-NaYF 4 :Yb,Er-PLGA-нанокур и NaYF 4 :Yb,Tm -PLGA-нанокур).

Рисунок 15. Светлопольное изображение органов ex vivo ( слева ) и эпилюминесцентное изображение органокомплекса мыши ( справа ). Внутривенная инъекция 0,75 мг UCNP через 4 часа после инъекции. (Верхний ряд-NaYF 4 :Yb,Er-PLGA и NaYF 4 :Yb,Tm-PLGA, нижний ряд-NaYF 4 :Yb,Er-PLGA-нанокур и NaYF 4 :Yb,Tm -PLGA-нанокур).

Таблица 1. Параметры решетки UCNP и комплексов UCNP-PLGA-нанокуркумин.

Таблица 1. Параметры решетки UCNP и комплексов UCNP-PLGA-нанокуркумин.

Образец Кристаллическая структура Параметры решетки (Å) Объем (Å 3 )
UCNP1 гексагональный NAYF 4 A = 5.9404; с = 3,5063 107.508
UCNP1-PLGA-нанокур гексагональный NaYF 4 а = 6,015; c = 3,5120 110,041
UCNP2 гексагональный NaYF 4 а = 5,9806; c = 3,5113 108,764
UCNP2-PLGAnanocur гексагональный NaYF 4 а = 6,0495; c = 3,5144 111,383
JCPDS No. 16-0334 гексагональный NaYF 4 a = 5.96; c = 3,51 107,974

ТАМА, Япония, Список компаний

Найдите компанию в Японии по вашим критериям (торговая марка, адрес, регистрационный номер в Японии…).

Info-clipper.com предоставляет деловую и кредитную информацию о японских фирмах.
Если ваша компания активно занимается международной торговлей, наш сервис может предоставить вам подробную информацию о ваших клиентах, конкурентах или поставщиках. Следите за их финансовыми показателями и кредитным рейтингом, проверяйте, есть ли незавершенные судебные иски или процедуры (ликвидация, неплатежеспособность и т…).
Следите за изменениями организационно-правовых форм, должностных лиц и законных представителей…

Если вы намерены инициировать поиск деловых партнеров по всему миру, вам необходимо точно знать свои перспективы. Бизнес-отчет предоставляет вам следующую информацию: данные японского регистра, акционеры, структура корпоративной группы по всему миру помогут вам понять реальный размер компании.
С кредитным рейтингом, специально рассчитанным в Японии, вы сможете сравнить и оценить кредитоспособность и риск банкротства японской компании.

ПРАЙМ ХОУМ ЦЕНТР, К.К. МАСТЕР СЕРВИС КО., ЛТД. ПОТРЕБНОСТИ, К.К. МАКС ИНЖИНИРИНГ, Ю.К. КЕЛ КОРПОРЕЙШН КОМПАНИЯ ГП, К.К. Л.А. Сид, Ю.К. М.Ю., К.К. TOKIO MARINE & NICHIDO COMMUNICATIONS CO., ООО ТОКИО МАРИН И НИЧИДО СИСТЕМС КО., ЛТД. ОБЩЕСТВО С ОГРАНИЧЕННОЙ ОТВЕТСТВЕННОСТЬЮ «КВАРТЕТ» САНДЕСУ КЦ К. К. САНДА СЕРВИС Ю.К. ПАТРИА НОВА, К.К. TOKYO SNOW PACIFIC K.K. ТОКИО ЭЛЕКТРОН КО., ЛТД. КОКУСАИ КО., ЛТД. ТАМАНА САЙШИГЕН, Ю.К. АСТРА, ООО САНСОНС, ОБЩЕСТВО С ОГРАНИЧЕННОЙ ОТВЕТСТВЕННОСТЬЮ КОМАНДА САКАИ, К.К. Н Т КОРПОРЕЙШН, К.К. ШИНО ДУГЛАС, К.К. КИХАЧИ К.К. CSFE, К.К. ВЛ ЭСТЕЙТ К.К. АЛИС КО., ЛТД. УНИВЕРСАЛЬНАЯ ТЕХНОЛОГИЯ К.К. ТОПИЯ, К.К. ДО АКАДЕМИЯ СПОРТА, Н. П.О. IIHO, GENERAL INC. АССОЦИАЦИЯ ОБЩЕСТВО С ОГРАНИЧЕННОЙ ОТВЕТСТВЕННОСТЬЮ «ХАЙ СТАР» СЛ КОМПАНИ, К.К. JTS CO., LTD. МОНКЛЕР ИНТЕРНЭШНЛ, К.К. ТОКИЙСКИЙ АРХИТЕКТОР К.К. ВЫПУСКНАЯ ШКОЛА ТАМИНСКОГО УНИВЕРСИТЕТА НИППОНСКАЯ МЕДИЦИНСКАЯ ШКОЛА БОЛЬНИЦА ТАМА НАГАЯМА ТРАСТЕК, К.К. НИТТО КОГЬО К.К. Р С АССОЦИАТЕС, Ю.К. RIKEN TECHNO SYSTEM, К.К. ПЕРСПЕКТИВНОЕ ПЛАНИРОВАНИЕ, К.К. ТОКИЙСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ НАУК ЗДРАВООХРАНЕНИЯ НОВЫЙ ГОРОД ВИДЕО, Ю.К. ПЕНТАКУН, К. К. СЕТЕВЫЕ СВЯЗИ Ю.К. ФУДЖИТА НЕДВИЖИМОСТЬ МЕНЕДЖМЕНТ К.К. КАФЕ АНО ПРОГРАММНОЕ ОБЕСПЕЧЕНИЕ К.К. САН КЕМИКАЛ, Ю.К. СОГО ЭЛЕКТРОНИКС, ИНК. НИППОН ЭМС ЛТД. КОРПОРАЦИЯ ЭФЕ АГГС ЯПОНИЯ К.К. ГЛОБАЛ АВТО СЕК ЛТД. ТЕАС КОРПОРЕЙШН СИСТЕМНЫЕ РЕШЕНИЯ TEAC K.К. ОБЩЕСТВО С ОГРАНИЧЕННОЙ ОТВЕТСТВЕННОСТЬЮ «УНИВЕРСАЛ ЭЙР» ПРОТЕХ Ю.К. ДЖОХОКУ КАНКЁ К.К. ДЖОХОКУ КАВАРА К.К. КП, Ю.К. НИХОНКОКИ, К. К. ГЛОБАЛ НИППОН, К.К. КЮШУ УНИВЕРСИТЕТ СЕСТРАНСКОГО И СОЦИАЛЬНОГО ЗАЩИТЫ КЮШУСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ СЕСТРАНСКОГО И СОЦИАЛЬНОГО БЛАГОСОСТОЯНИЯ ВЫПУСКНАЯ ШКОЛА ЯПОНСКИЙ ФОРУМ, Ю.К. ЦБМ, К.К. TENMAYA SPORTS PARTNERS, К.К. ГЛАВНАЯ SOGO INSURANCE AGENCY INC. ИНСТИТУТ СООБЩЕСТВЕННОГО ДИЗАЙНА, ОБЩЕСТВО С ОГРАНИЧЕННОЙ ОТВЕТСТВЕННОСТЬЮ ООКИ, К.К. ЦИФРОВАЯ СТАНЦИЯ КО., ЛТД. ЯИЧНАЯ КОМПАНИЯ МОИ ПЕКАРНЯ АЕРИЯ, Ю.К. MES POWER ELECTRONICS INDUSTRY CO., LTD. ЭЛЬ МОНДО, К.К. КОА КЕНСЕЦУ КОГЁ К. К. ОГА ПАН, Ю.К. АВТО ГРЕЙС, Ю.К. ОБЩЕСТВО С ОГРАНИЧЕННОЙ ОТВЕТСТВЕННОСТЬЮ «ФИС» ИНКРЕМЕНТ КОРПОРЕЙШН ИНФО ПИА, Ю.К. ХОЙОКУ ДЖОХО ТЕХНОЛОДЖИ, Ю.К. НИППОН ИКА ЭКСПЕРТ Ю.К. ОФИС КАМОНОХАСИ, Г.К. КАНАДСКИЙ, К.К. ПИБ, К.К. ЧВК ЯПОНИЯ, Ю.К. КАНАДСКИЙ АВТО ТЕХНО ПОИСК КОРП. НП ПРОМОУШН, К.К. ШИМАДА ДЕНКО, Ю.К. ИНКОРПОРАЛ, К.К. SJE JAPAN, К.К. ИСЦЕЛЕНИЕ, К.К. ПРОСТРАНСТВЕННАЯ ЛИНИЯ К.К. Джей Блю, Ю.К. ПОД КОМПАНИЯ, Ю.К. ТОКИЙСКИЙ ИНСТИТУТ ИНОСТРАННЫХ ЯЗЫКОВ SIM ДРУГАЯ ЖИЗНЬ, К.К. ЗЕЛЕНАЯ ПОСТАВКА К.К. МУЗЫКАЛЬНОЕ ИЗДАТЕЛЬСТВО БЕНЕСС.БЕНЕСС СОЦИУС КО., ЛТД. БЕНЕСС БИЗНЕС-МАТЕ, ИНК. РОВ, К.К. ДЕЙВ, Ю.К. КАНЕДА КО., ЛТД. КРЕМНИЕВЫЙ КВАДРАТ К.К. ДВУСТОРОННЯЯ СВЯЗЬ К.К. ИМПОРТ АВТОМОБИЛЬНЫХ ТЕХНОЛОГИЙ К.К. ТРЕНЕР ИШИБА ЯПОНИЯ ОБЩЕСТВО С ОГРАНИЧЕННОЙ ОТВЕТСТВЕННОСТЬЮВИНУКА К.К. Б2, Ю. К. ОДИН ДЕВЯНОСТО, К.К. ИЧИДА СУМА ГОРОД, ОБЩЕСТВО С ОГРАНИЧЕННОЙ ОТВЕТСТВЕННОСТЬЮ СКЭНДИК.КО. СЭ ДО, Ю.К. ПРЕДПРИЯТИЕ КОСМОС, Ю.К. ПРОЕКТИРОВАНИЕ, К.К. КО ВАСКС., ООО ТОЙОТОМИ С.П., Ю.К. ЦИФРОВАЯ СЕТЬ ИНК. ВИСТЕР ЭЛЕКТРОНИКС КОРПОРЕЙШН БЕВЕРЛИ, Ю.К. ТАМА ИНТЕРНЕТ СЕРВИС, Ю.К. Б НАКС, К.К. АЙДИМАР К.К. КОРПОРАЦИЯ ЛОТОС МЕЗОН ДЕ МАРИ, К.К. WASEDA ROOSTER CO. , LTD. ДЭН К.К. МЕХАТРОНИКА, Ю.К. ВАНОКА, К.К. РЕАЛЬНОСТЬ ТОВАРИЩЕСТВО С ОГРАНИЧЕННОЙ ОТВЕТСТВЕННОСТЬЮ «КОШИП» ХИРУТА ХОЛДИНГС, К.К. НИХОН ТОКУШУ РОЗАЙ К.К. НАЙТ ТЕХНОЛОДЖИ КО. ЛТД.ДЖУКИ КОРПОРЕЙШН ОБЩЕСТВО С ОГРАНИЧЕННОЙ ОТВЕТСТВЕННОСТЬЮ «3MA ENTERTAINMENT» ТОВАРИЩЕСТВО С ОГРАНИЧЕННОЙ ОТВЕТСТВЕННОСТЬЮ «САННИ ДЕЙЗ» САКУРА ЖИВАЯ К.К. ЮКЕН КОУГЬЮ КО., ЛТД. СИСТЕМНЫЕ СЕТИ К.К. АДМАП ИНК. ФЛЭР КОРПОРАЦИЯ КРУИЗ МОТОРЫ ЯМАТОКАЙСКАЯ КОРПОРАЦИЯ СОЦИАЛЬНОГО БЛАГОПОЛУЧИЯАЙГА Ю. К. АЙГА КОГЬО, К.К. ПЕРЕДОВАЯ ЛАЗЕРНАЯ ТЕХНОЛОГИЯ, К.К. МОРСКОЙ ТЕАТР, Ю.К. СНК., ООО СЁЭЙ, К.К. BEST CARE TOKYO,INC. JMC, Ю.К. ЗЕЛЕНАЯ ЯПОНИЯ К.К. МОШИМОШИ, Ю.К. ПЛАНДИТ КО., ЛТД. НК КОРПОРЕЙШН, К.К. ТОВАРИЩЕСТВО С ОГРАНИЧЕННОЙ ОТВЕТСТВЕННОСТЬЮ «НЕКУШИ» ШКОЛА НАУКИ О ПРИРОДЕ, GENERAL INC. АССОЦИАЦИЯ ЖИВУЮ ДВА, К.К. СЕМЕЙНАЯ БОЛЬНИЦА ДЛЯ ЖИВОТНЫХ РИФУР СЕРВИС, Ю.К. ФП К.К. ТРЦ НЕТ, Ю. К. ИНФО ЭСТЕЙТ Ю.К. КОРПОРАЦИЯ СИСТЕМ АВТОМАТИЗАЦИИ JUKI СВОБОДНАЯ НАДЕЖДА, К.К. СООБЩЕСТВО ЛЮБИМЧИКОВ, К.К. АРТРАНС, Ю.К. НИШИНИХОН К.К. НИШИНИХОН КАКО К.К. БАККАРА ДАЙКИН КОГЬО, К.К. ПАНТЕОН, К.К. ИНСТИТУТ НИХОНГО, Ю.К. Т СЕРВИС К.К. ПРЕСТИЖ ТОКИО, К.К. MITSUI E&S TECHNICAL RESEARCH CO., LTD. КЛИНИЧЕСКАЯ ПОДДЕРЖКА, К.К. КС, К.К. ТЭО, Ю.К. 5-HT LAB, К. К. ДЖИНИ ИНК. Нинокс, К.К. ХСТ, ОБЩЕСТВО С ОГРАНИЧЕННОЙ ОТВЕТСТВЕННОСТЬЮ ТОВАРИЩЕСТВО С ОГРАНИЧЕННОЙ ОТВЕТСТВЕННОСТЬЮ «ТАКАСКИ» МАМС К.К. FCE ДЕЛИ ТЕХ К.К. СЕДЖУ, К.К. ЦИФРОВОЕ КРАФТ21, ИНК. ИВАШИТА, К.К. АТЛАС, Ю.К. С.С КАНРИ СЕРВИС, Ю.К. ОБЩЕСТВО С ОГРАНИЧЕННОЙ ОТВЕТСТВЕННОСТЬЮ «С энд К» ЭТ Ч ХОЛДИНГ К.К. К СТРАТЕГИЧЕСКИЙ КОНСУЛЬТАЦИЯ, ОБЩЕСТВО С ОГРАНИЧЕННОЙ ОТВЕТСТВЕННОСТЬЮ KIRAMEKI CARE SERVICE, Y.K. ТАМА ТОКАН СЕРВИС К. К. МУЛЬТИФИЛД, Ю.К. ТОКИО ТАМА КОМПЛЕКСНЫЙ ЦЕНТР ПСИХИЧЕСКОГО ЗДОРОВЬЯ И БЛАГОПОЛУЧИЯ БЕЗУПРЕЧНЫЙ ТРЕЙДИНГ К.К. ОБЩЕСТВО С ОГРАНИЧЕННОЙ ОТВЕТСТВЕННОСТЬЮ «АКАЗАКИ» ИМАБАРИ КЕНСЕЦУ К.К. ONE GROUP, ОБЩЕСТВО С ОГРАНИЧЕННОЙ ОТВЕТСТВЕННОСТЬЮ ТОЛЬКО ОДНА ГРУППА, К.К. КС ХОЛДИНГ, К.К. SHOWA LIFE SCIENCE, Ю.К. КРОУФОРД, Ю.К. ТОКА КО., ЛТД. МАРУМИЯ, К.К. РЕНОВА СОЛЮШНЗ КО., ЛТД. ДЕ НОРА ПЕРМЕЛЕК ТЕХНО СЕРВИС ., ООО. Альтенир Инк. АЗИЯ ТРЕЙДИНГ КО. ЛТД. АСИЛЕ К.К. S-CUBE, К.К. ДЖИН КОГЬО, ОБЩЕСТВО С ОГРАНИЧЕННОЙ ОТВЕТСТВЕННОСТЬЮ Джей-Бит, Ю.К. ДОМАШНЯЯ ТЕХ К.K. ING ROAD, K.K. PROUD CORPORATION KIGYONAI KYOSAIKAI COMPLIANCE KENKYUKAI, GENERAL INC. ASSOCIATION OKAYAMAKEN GESUIDO KOSHA, PUBLIC INTEREST FOUNDATION SATO FLOWER, Y.K. YOSHIMOTO KOGYO NANKAN TOWN ONE TEAM, LIMITED LIABILITY CO.ГП А ЯПОНИЯ К.К. МИРОВЫЕ СИСТЕМЫ, К.К. ОБЩЕСТВО С ОГРАНИЧЕННОЙ ОТВЕТСТВЕННОСТЬЮ «Я ПЛАНИНГ» ЗАБЕРИТЕ ДОМ, К. К. УЧИЯМА, Ю.К. ХАШИГУТИ, Ю.К. НОЗОМИ КОРПОРЕЙШН ТАНОТЕХ, Ю.К. ЭЛЕКТРИЧЕСКИЕ СИСТЕМЫ, К.К.ХК ХОЛДИНГС, К.К. НИНОКС КО., ЛТД. КД МАЙНИНГ, К.К. ДЖЕТ СЕТТЕРС, Ю.К. ЛУННАЯ КОМПАНИЯ, К.К. ЭСВАТЕРНЕТ КО., ЛТД. НИВА, ОБЩЕСТВО С ОГРАНИЧЕННОЙ ОТВЕТСТВЕННОСТЬЮ ТКК МОРСКОЕ ПРЕДПРИЯТИЕ, К.К. МОРСКОЙ ДОСТУП OE ТРИ КОРПОРЕЙШН, К.К. ОБЩЕСТВО С ОГРАНИЧЕННОЙ ОТВЕТСТВЕННОСТЬЮ «ФАЙН ПЕРВЫЙ» FAIRWAY CLUB, К.К. ОКАМОТО КАЗУФУМИ КОЭНКАЙ JAPAN ELECTRIC POWER SERVICE, CO. , LTD. МАСТЕРМАЙД ИНК. ЭЙОШИ, К.К. ИНГУРЕССО, К.К. ИФК, К.К. Ф ДИЗАЙН, ОБЩЕСТВО С ОГРАНИЧЕННОЙ ОТВЕТСТВЕННОСТЬЮМГИ КО., ЛТД. КОБО МАТЕРИАЛ, Н.П.О. МЕНЯ К.К. ВОСТОК-ЗАПАД ТРЕВЕЛ, К.К. ОБУЧЕНИЕ ПРОДУКТЫ УСЛУГИ КИКУГАВА ТАЙХЕЙО КОСАН, К.К. Y КОНСУЛЬТАНТ, Ю.К. ЧАСТНОЕ УПРАВЛЕНИЕ, К.К. КОСМИЧЕСКАЯ ПЛОЩАДКА, Ю.K. NENE GOOSE COMPANY, K.K. SHIMOKATA KAZUSHI KOUENKAI GYOKUEI KENSETSU, Y.K. GYOKUEIKAN, Y. K. ARTCORE K.K. NARUSE KIZAI Y.K. TAMA UNIVERSITY TAMA UNIVERSITY ATTACHED HIJIRIGAOKA JUNIOR HIGH SCHOOL SEISEKI HOUSING, Y.K. TOYOKAWA CO.,LTD. MITSUMI ELECTRIC CO., LTD. TSURUMAKI SHIKA TAMANO HIGH SCHOOL RAY ENGINEERING, Y.K. GO FUTONTEN, Y.K. HIMEC CORPORATION KOTOBUKIYA, G.K. CFC, LIMITED LIABILITY CO.ЭДОЧО, Ю.К. МЕДИА ФОРЕСТ, К.К. ЭЛИКС, ОБЩЕСТВО С ОГРАНИЧЕННОЙ ОТВЕТСТВЕННОСТЬЮ М ЭТИКЕТКА, К. К. FLACKS NETWORKS, Ю.К. СИНАРНАЯ ПРИРОДА, Ю.К. БЛЕ АРТЕ ВЫ КА ЯПОНИЯ К.К. Э И Э КОНСАЛТИНГ К.К. ИНТЕРНЕШНЛ ФУДС КО.,LTD. SANZO MARINE&MANUFACTURING TECHNOLOGY INC. BUPPAN JAPAN K.K. AKAI TOKUSHU KINZOKU K.K. TAMANO MINICON SERVICE, Y.K. KAMBARA, K.K. NISHIZAKA TECHNO SERVICE, Y.K. SOSU, Y.K. JAPAN MEGA SOLAR DEVELOPMENT K.К. ТОКИО СОФТ, Ю.К. СИБУКАВА КАНКО К.К. KYUSHU ORGAN NEEDLE CO., LTD. СЕДАК, К.К. МАЙСОФТ, К.К. ЭСТО КО., ЛТД. ТЕТО ТЕ, ОБЩЕСТВО С ОГРАНИЧЕННОЙ ОТВЕТСТВЕННОСТЬЮ КОРПОРАЦИЯ СИНИЙ ОКЕАН НИППОН ПРОГРАММНОЕ ОБЕСПЕЧЕНИЕ КО.ООО ФРЕШТЕЯ ЯПОНИЯ К.К. РЕЙБИСО, Ю.К. КМ СТАЛЬ, К.К. КОНИ КО., ЛТД. ИНФО ТЕХНО АСАХИ, К.К. АСО ЯПОНИЯ, К.К. СИН СОЗДАТЬ, Ю.К. КО. Г.Т.С., ЛТД. ТО-ОН КОРПОРАЦИЯ КАЙО КОГЁ Ю.K. NAGAO TECHNO SERVICE K.K. ARAI MOTORS TAMA, K. K. TAMAIKAI SOCIAL WELFARE CORP. NEW CENTURY KIKAKU, K.K. TATSUMI HAMONO, Y.K. NAKASHIMA K.K. SHIGEN, K.K. SHUNYOKAI AOI IIN MEDICAL ASSOCIATION HELIOS, Y.К. ОБЩЕСТВО С ОГРАНИЧЕННОЙ ОТВЕТСТВЕННОСТЬЮ «УИЛЛ СЕРВИС» КОМЕДИЯ, К.К. Д АИД К.К. КЁКУТО КОРПОРЕЙШН, К.К. МАКОТО САНГЁ Ю.К. GLOBAL MARKET ENTERPRISE, К.К. ТОКИО АРТ ОФ ЛАЙФ, ОБЩЕСТВО С ОГРАНИЧЕННОЙ ОТВЕТСТВЕННОСТЬЮ ТАМА ГАЗ ЖИЗНЬ К.К. ГЁКУХО, К.К. КИКУГАВА КЕНСЕЦУ К. К. КИКУГАВА ТАТАМИТЭН ОБЩЕСТВО С ОГРАНИЧЕННОЙ ОТВЕТСТВЕННОСТЬЮ «ХОЯ СИСТЕМ»

Список популярных поисковых запросов компаний в Японии
Японские компании, входящие в корпоративное генеалогическое древо

SEC.gov | Порог частоты запросов превысил

Чтобы обеспечить равный доступ для всех пользователей, SEC оставляет за собой право ограничивать запросы, исходящие от необъявленных автоматических инструментов.Ваш запрос был идентифицирован как часть сети автоматизированных инструментов, выходящих за рамки приемлемой политики, и будет управляться до тех пор, пока не будут предприняты действия по объявлению вашего трафика.

Пожалуйста, заявите о своем трафике, обновив свой пользовательский агент, включив в него информацию о компании.

Чтобы ознакомиться с рекомендациями по эффективной загрузке информации с SEC.gov, включая последние документы EDGAR, посетите сайт sec. gov/developer. Вы также можете подписаться на рассылку обновлений по электронной почте в программе открытых данных SEC, включая передовые методы, которые делают загрузку данных более эффективной, и SEC.gov, которые могут повлиять на процессы загрузки по сценарию. Для получения дополнительной информации обращайтесь по адресу [email protected]

Для получения дополнительной информации см. Политику конфиденциальности и безопасности веб-сайта SEC. Благодарим вас за интерес, проявленный к Комиссии по ценным бумагам и биржам США.

Идентификатор ссылки: 0.67fd733e.1647773147.10b56604

Дополнительная информация

Политика безопасности Интернета

Используя этот сайт, вы соглашаетесь на мониторинг и аудит безопасности.В целях безопасности и для обеспечения того, чтобы общедоступные услуги оставались доступными для пользователей, эта правительственная компьютерная система использует программы для мониторинга сетевого трафика для выявления несанкционированных попыток загрузить или изменить информацию или иным образом нанести ущерб, включая попытки отказать в обслуживании пользователям.

Несанкционированные попытки загрузки информации и/или изменения информации в любой части этого сайта строго запрещены и подлежат судебному преследованию в соответствии с Законом о компьютерном мошенничестве и злоупотреблениях от 1986 года и Законом о защите национальной информационной инфраструктуры от 1996 года (см.S.C. §§ 1001 и 1030).

Чтобы гарантировать, что наш веб-сайт хорошо работает для всех пользователей, SEC отслеживает частоту запросов контента SEC.gov, чтобы гарантировать, что автоматический поиск не повлияет на способность других получать доступ к контенту SEC.gov. Мы оставляем за собой право блокировать IP-адреса, отправляющие чрезмерные запросы. Текущие правила ограничивают количество пользователей до 10 запросов в секунду, независимо от количества компьютеров, используемых для отправки запросов.

Если пользователь или приложение отправляет более 10 запросов в секунду, дальнейшие запросы с IP-адреса(ов) могут быть ограничены на короткий период. Как только количество запросов упадет ниже порогового значения на 10 минут, пользователь может возобновить доступ к контенту на SEC.gov. Эта практика SEC предназначена для ограничения чрезмерных автоматических поисков на SEC.gov и не предназначена и не ожидается, что она повлияет на отдельных лиц, просматривающих веб-сайт SEC.gov.

Обратите внимание, что эта политика может измениться, поскольку SEC управляет SEC.gov, чтобы обеспечить эффективную работу веб-сайта и его доступность для всех пользователей.

Примечание: Мы не предлагаем техническую поддержку для разработки или отладки процессов загрузки по сценарию.

Введение

Введение

Сахарные спирты (полиолы) используются в качестве подсластителей или заменителей сахара, обеспечивая несколько меньше калорий, чем сахароза, поскольку плохо всасываются в желудочно-кишечном тракте [1]. Маннитол, наиболее распространенный полиол, обычно встречается более чем в 50 видах растений, водорослей, грибов и лишайников [2, 3]. Он является одним из основных продуктов фотосинтеза и повышает устойчивость растений и водорослей к солевому и осмотическому стрессу [4–6]. Эти физико-химические особенности делают маннит подходящим для использования в качестве наполнителя при таблетировании в фармацевтической промышленности, поскольку в качестве ключевого компонента он может стабилизировать белки при составлении рецептуры и лиофилизации [7].

Маннитол не получил широкого распространения в качестве питательного источника углерода в животном мире, о нем сообщалось лишь у нескольких насекомых [8]. Предыдущие исследования суммировали использование полиолов, включая маннит, у нескольких насекомых [9, 10]. Хлопковая тля Aphis gossypii продуцирует и накапливает маннит как криопротектор против холодового стресса [8]. В Bombyx mori маннит был менее эффективен в качестве питательного вещества, чем другие сахариды [11]. У Schistocerca gregaria и Locusta migratoria добавление 11% маннита в рацион увеличивало их вес по сравнению с отсутствием маннита в рационе [12], поскольку маннит продлевал пищевое поведение. Аналогичные результаты были получены и с жесткокрылым насекомым. Вредитель продуктов хранения Tribolium castaneum является серьезным вредителем в сельском хозяйстве, поражающим пшеничную муку, шоколад и орехи, в том числе обработанные пищевые продукты [13, 14]. Поступление с пищей взрослых особей T. castaneum активировалось некоторыми сахарами и сахарными спиртами. В частности, они предпочитали маннит в качестве подсластителя [15]. Однако остается неясным, использует ли T. castaneum маннит в качестве питательного вещества. На данный момент эти и другие исследования Tribolium sp.предоставили описания, связанные с использованием полиолов; однако путь метаболизма маннита у этих насекомых подробно не освещен в общей литературе [9, 10]. В базах данных Киотской энциклопедии генов и геномов (KEGG) позвоночные и беспозвоночные, включая T. castaneum, не указаны как обладающие генами, участвующими в синтезе и деградации маннита (https://www.kegg.jp. [16]). Также возможно, что T. castaneum распознает маннит как некалорийный подсластитель. Чтобы прояснить этот вопрос, необходимо оценить период выживания взрослых особей T. castaneum, получавших маннит в качестве единственного источника углерода.

На сегодняшний день некоторые гены ферментов и факторов активации транскрипции были идентифицированы в условиях углеводного питания или голодания с использованием микрочипов у дрозофилы. Некоторые гены глюкозидазы активировались в зависимости от количества углеводов в пище [17]. Диета, состоящая только из углеводов, вызывала изменения в уровнях транскриптов РНК, что влияло на накопление и метаболизм жиров и углеводов, а также на продолжительность жизни восточной плодовой мушки Bactrocera dorsalis [18].Учитывая, что насекомые претерпевают транскрипционные изменения при кормлении углеводами, ожидается, что будут идентифицированы некоторые гены, связанные с специфическим для маннита метаболизмом, которые активируются потреблением маннита у T. castaneum. Основываясь на данных секвенирования РНК, в этом исследовании была проанализирована разница в экспрессии генов у жуков, которых кормили рационами, содержащими маннит, и рационами без углеводов.

Материалы и методыНасекомые

красных мучных жука Tribolium castaneum (Herbst) были получены от Sumica Technoservice Co.(Hyogo, Япония) и выращенных на органической цельнозерновой муке (Pioneer-kikaku, Канагава, Япония), содержащей 5% дрожжей (Saf-instant, Lesaffre, Marcq-en-Baroeul, Франция) при 29 ± 1°C и 70% относительная влажность при цикле 16L:8D. Вновь появившихся взрослых особей содержали без еды в течение недели и использовали для анализа потребления пищи и анализа РНК-сек. Самцов и самок насекомых разделяли на стадии куколки и содержали до взрослой стадии для анализа выживания.

Анализ потребления с пищей

Для изучения потребления с пищей T.castaneum использовали анализ TribUTE (TriboliumUrges To Eat), который измеряет количество гипса в экскрементах жуков, питающихся гипсом, неперевариваемым и нетоксичным соединением [15]. Вкратце, искусственный гипсовый рацион состоял из сухого гипсового порошка и воды, смешанных в соотношении 1,3:1 (масс./масс.), и содержал 200 мМ растворов сахарозы или маннита. Безуглеводные гипсовые диеты не дополнялись никакими органическими соединениями, т. е. состояли только из воды. Взрослые особи Tribolium castaneum голодали в течение 1 недели, так как им не давали никакой пищи, чтобы облегчить их пищевое поведение.Каждому жуку давали гипсовый блок (куб со стороной примерно 5 мм) в 24-луночном полистироловом микропланшете, а взрослые особи T. castaneum содержали при 25°C. Гипс, проглоченный взрослыми, в конечном итоге выводится из организма без переваривания в виде отходов, которые можно измерить. Затем фекалии растворяли в 50 мкл деионизированной воды для удаления углеводов и тщательно сушили осадок гипса при 65°С в течение 24 ч. Количество съеденного гипса измеряли с помощью аналитических микровесов (AT201, Mettler-Toledo, OH, USA).

Выживание взрослых особей T. castaneum

Каждый блок гипсового корма размером приблизительно 5 мм, содержащий 200 мМ сахарозы, 200 мМ маннита или только воду, отдельно давали взрослым, голодавшим в течение 1 недели, и помещали в отдельные лунки на 24-луночном полистироловом микропланшете. Набор микропланшетов хранили при 25°C и относительной влажности 70% в цикле 16L:8D. Количество погибших жуков подсчитывали ежедневно до 32 дней. Эксперимент продолжался до тех пор, пока все жуки не погибли. Статистическую значимость определяли с помощью теста логарифмического ранга.

Коллекция гемолимфы

Гемолимфу собирали по методу, обычно принятому для подобных исследований на имаго дрозофилы [19], с частичными модификациями для имаго T. castaneum. С помощью пинцета под стереоскопическим микроскопом на охлаждающем блоке при 0°С удаляли ножки жуков. На одну обработку 20 жуков помещали в тонкостенную полипропиленовую пробирку объемом 500 мкл на одну обработку (Thermo Fisher Scientific, Карлсбад, Калифорния, США). Опыты проводились в трехкратной повторности. Центрифугирование проводили при 8000 g, при 4°С в течение 20 мин.Гемолимфу до использования хранили при температуре –30°С. Самцов и самок насекомых не разделяли, поскольку в течение первых 48 часов их потребление с пищей не зависело от пола, как описано в предыдущем исследовании [15].

Количественное определение углеводов в гемолимфе T. castaneum

Один микролитр гемолимфы из каждого образца разбавляли 99 мкл дистиллированной воды и смешивали с эквивалентным количеством ацетонитрила для удаления гемоцитов и белков; растворы центрифугировали при 8000 g при 4°C в течение 10 мин перед количественным анализом углеводов гемолимфы.Супернатант полностью высушивали центрифугированием при пониженном давлении. Углеводы элюировали стерилизованной дистиллированной водой, содержащей 1% (мас./об.) раффинозы в качестве внутреннего стандартного контроля. Углеводы анализировали с помощью ВЭЖХ, оснащенной колонкой для разделения сахара (shim-pack SCR101N, 7,9 мм × 300 мм; Shimadzu, Токио, Япония). ВЭЖХ-анализ следовал ранее описанным процедурам [20].

Количественное определение триглицеридов в жировом теле T. castaneum

взрослых особей T. castaneum, голодавших в течение одной недели, получали гипс с 200 мМ маннита или гипсовый блок без углеводов в течение 48 ч при 25°C.Двадцать взрослых особей препарировали в стерилизованном PBS с помощью пинцета, а полученные жировые тела собирали в микроцентрифужную пробирку. Опыты проводили в четырех биологических повторностях. Количество триглицеридов в жировом теле определяли с использованием набора для количественного определения триглицеридов (Abcam, Токио, Япония) в соответствии с инструкциями производителя. Интенсивность флуоресценции измеряли с помощью планшет-ридера (Infinite 200 TECAN Trading AG, Männedorf, Швейцария) с фильтрами (возбуждение 530/20 нм, эмиссия 600/20 нм) при 20°С.Половину гомогенизированного раствора использовали для измерения белка, поскольку протокол количественного определения триглицеридов требовал ресуспендирования жировых тел в 5% NP-40 в качестве детергента. Содержание белка в жировом теле определяли количественно с использованием анализа белка Брэдфорда (Bio-Rad, Hercules, CA, USA).

Экстракция тотальной РНК и секвенирование

Двадцать взрослых особей T. castaneum получали гипсовую диету с 200 мМ маннита или без углеводов (т.е. только воду) при 25°C в течение 48 часов. Самцов и самок насекомых не разделяли, поскольку пол не влиял на потребление пищи в первые 48 часов, как описано в предыдущем исследовании [15]. Тотальную РНК жуков выделяли с использованием ISOGEN II (NIPPON GENE, Токио, Япония) в соответствии с инструкциями производителя. Качество тотальной РНК было подтверждено с использованием нескольких методов и следующего оборудования: спектрофотометра Nanodrop (Thermo Fisher Scientific) и флуорометра Qubit 3.0 (Thermo Fisher Scientific) для количественного определения, электрофореза в агарозном геле для наблюдения за деградацией РНК и потенциального загрязнения, а также Agilent. Биоанализатор 2100 (Agilent Technologies, Санта-Клара, Калифорния, США) для проверки целостности и количественного определения РНК.Две библиотеки Illumina для секвенирования были приготовлены с использованием набора для подготовки образцов ДНК с парными концами (Illumina, Сан-Диего, Калифорния, США) в соответствии со стандартными инструкциями, и были секвенированы считывания парных концов длиной 150 п.н. Конструирование библиотеки, реакцию синтеза кДНК и секвенирование выполняли Filgen Inc. (Aichi, Япония). Библиотеку RNA-Seq секвенировали с использованием системы секвенирования HiSeq 4000 (Illumina). Чтения необработанных последовательностей можно получить из архива чтения последовательностей DDBJ (DRA) под номером доступа DRA007274.

Анализ RNA-Seq

Эталонные последовательности T. castaneum были получены от NCBI (ID: 216). Гены были аннотированы с использованием BLAST2GO Pro (BioBam Bioinformatics SL, Валенсия, Испания). Обогащение Gene Ontology анализировали с помощью программного обеспечения GOSeq [21]. TopHat v2.0.12 использовали для сопоставления прочтений с эталонным геномом T. castaneum. HTSeq v0.6.1 использовали для подсчета числа прочтений, сопоставленных с отдельными генами, для количественной оценки уровней экспрессии генов [22]. Ожидаемое количество фрагментов на килобазу последовательности транскрипта на миллион секвенированных пар оснований (FPKM) каждого гена рассчитывали на основе длины гена и количества прочтений, сопоставленных с этим геном.KOBAS v2.0 использовали для анализа обогащения генов с базами данных Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes (KEGG, https://www. kegg.jp [16]).

Количественная ОТ-ПЦР

Для проверки RNA-Seq. был проведен набор процессов для анализа кормления T. castaneum, экстракции тотальной РНК и транскрипции кДНК. Реагенты и инструменты измерения были идентичны описанным выше. Биологические образцы готовили независимо от образцов для анализа RNA-Seq. Одноцепочечную кДНК синтезировали из 500 нг тотальной РНК с использованием мастер-микса реагентов PrimeScript RT (TaKaRa Bio, Shiga, Япония) в соответствии с инструкциями производителя, а концентрации и качество измеряли с использованием NanoPhotometer NP80 (Implen, München, Germany). ).В качестве якорного праймера использовали как oligo dT, так и Random 6 праймеры. Количественную ОТ-ПЦР проводили с использованием SYBR Premix Ex Taq II (Tli RNaseH Plus, TaKaRa Bio) на приборе StepOnePlus (Thermo Fisher Scientific). Относительные уровни экспрессии рассчитывали с использованием метода 2 -ΔΔCt . Специфичность последовательностей праймеров и амплифицированных участков была подтверждена поиском BLASTN в отношении генома Tribolium в базе данных NCBI. Ген внутреннего стандарта, RpS3 (рибосомный белок S3 T. castaneum — доступ NCBI: NM_001172392.1) использовался в качестве гена домашнего хозяйства из-за стабильности его экспрессии на разных стадиях жизни, а именно от личинки до взрослой особи [23, 24]. Последовательности праймеров, использованные для этих анализов, показаны в таблице S1.

Результаты. Влияние гипсовой диеты с добавлением маннита на продолжительность жизни взрослых особей Tribolium castaneum. скармливали Т.Кастанеум взрослые. Несмотря на то, что диетическое потребление гипса с углеводами существенно не отличалось между мужчинами и женщинами в течение короткого периода времени 48 часов [15], продолжительность жизни значительно различалась между мужчинами и женщинами, когда они получали маннит в течение более 18 дней (рис. 1А). Поэтому анализы на выживаемость жуков исследовали с использованием самок. В отсутствие углеводов гипс не влиял на продолжительность жизни по сравнению с отсутствием пищи, в то время как продолжительность жизни взрослых особей T. castaneum продлевалась за счет введения гипса с дозировкой 200 мМ сахарозы или 200 мМ маннита.В этих последних условиях продолжительность жизни существенно не отличалась (рис. 1В). Сахароза, дисахарид, состоящий из глюкозы и фруктозы, метаболизируется как источник углеводов. Эти результаты показывают, что T. castaneum может использовать маннит в качестве источника углерода, а также сахарозу.

10.1371/journal.pone.0207497.g001Рис. 1 Выживание взрослых особей T. castaneum на основе анализа гипсовой диеты.

взрослых особей Tribolium castaneum, голодавших в течение 1 недели, кормили индивидуально гипсовыми блоками и поддерживали при температуре 25°C и относительной влажности 70% при цикле 16L:8D.(A) Сравнение продолжительности жизни мужчин и женщин. Каждому жуку скармливали гипсовую диету с добавлением 200 мМ маннита. Статистическую значимость определяли с использованием критерия логарифмического ранга (Мантела-Кокса) (P ≤ 0,0001). (B) Влияние углеводов на продолжительность жизни взрослых самок T. castaneum. 200 мМ сахарозы, гипсовая диета в присутствии 200 мМ сахарозы; 200 мМ маннита, гипсовая диета в присутствии 200 мМ маннита; вода, гипс без углеводов; лишенный пищи. Данные анализировали с помощью логарифмического критерия (Мантела-Кокса) и тестов Бонферрони и Сидака для множественных сравнений.Вода по сравнению с маннитом, P ≤ 0,0001; сахароза по сравнению с маннитом, P = 0,2212 (незначительно).

Потребление маннита

Измеряли содержание маннита в гипсовой диете с добавлением 200 мМ маннита и в фекалиях взрослых особей T. castaneum. Количество маннита в рационе 31,2 ± 0,8 мкг/мг гипса; в экскрементах он был значительно снижен, 11,3 ± 1,0 мкг/мг гипса (рис. 2), что свидетельствует о том, что маннит транспортируется через кишечник в гемолимфу или превращается в другие метаболиты в полости кишечника.

10.1371/journal.pone.0207497.g002Рис. 2 Количественное определение маннита в гипсовой диете и экскрементах.

Количество маннита в гипсовой диете и в продуктах жизнедеятельности, выделяемых взрослыми особями Tribolium castaneum, показано в виде диаграмм (наивысшее значение, верхний квартиль, медиана, нижний квартиль и наименьшее значение). Взрослые особи T. castaneum голодали в течение 1 недели, чтобы улучшить пищевое поведение. Взрослых особей T. castaneum кормили гипсовой диетой с добавлением 200 мМ маннита в течение 48 ч, а экскременты особей (n = 8) собирали для количественного определения маннита.Столбики погрешностей показывают С.Д. Статистическую значимость определяли с помощью t-критерия («****» P ≤ 0,0001). Представленный результат является репрезентативным для нескольких отдельных экспериментов. Полный набор данных, полученных для биологических повторностей, приведен в дополнительных данных.

Углеводы в гемолимфе

Количество углеводов в гемолимфе определяли после того, как взрослые особи T. castaneum получали гипсовую диету с добавлением 200 мМ маннита. Маннитол исчез из гемолимфы (рис. 3А). Когда Т.castaneum получали гипсовую диету без углеводов (только вода), трегалоза, известная как сахар гемолимфы, не была обнаружена в гемолимфе, потому что трегалоза использовалась бы в качестве источника углерода во время голодания (рис. 3В). Когда взрослых особей T. castaneum кормили гипсовой диетой с добавлением маннита в течение 48 ч, в гемолимфе обнаруживали трегалозу (рис. 3А).

10.1371/journal.pone.0207497.g003Рис. 3 Количественное определение углеводов в гемолимфе взрослых особей T. castaneum.

взрослых особей Tribolium castaneum голодали в течение недели, чтобы улучшить пищевое поведение. Глк, глюкоза; Frc, фруктоза; Человек, маннитол; Тре, трегалоза. Данные представляют собой среднее  ± S.D. Представленные результаты являются репрезентативными для нескольких отдельных экспериментов. (A) Взрослые особи T. castaneum получали гипсовую диету с добавлением 200 мМ маннита или без углеводов (только вода) в течение 48 часов. Гемолимфу получали после приема гипса с пищей. Статистический анализ проводили с использованием двухфакторного дисперсионного анализа [F(DFn, DFd): F(3, 16) = 56.86, P ≤ 0,0001] и апостериорный критерий множественных сравнений Сидака (****, P ≤ 0,0001) для сравнения диетического лечения и углеводов как факторов. (B) Углеводы в гемолимфе при обычной диете. «Недоедающие» — это результаты, полученные для взрослых особей T. castaneum после голодания в течение недели, «кормление» означает, что взрослых особей T. castaneum кормили обычной пищей, цельнозерновой мукой, содержащей 5% дрожжей. Выполненный статистический анализ представлял собой двусторонний ANOVA [F(DFn, DFd): F(3, 16) = 524,9, P ≤ 0,0001] и апостериорный критерий множественных сравнений Сидака (****, P ≤ 0.0001).

Содержание триглицеридов в жировом теле T. castaneum

Пищевые углеводы метаболизируются в триглицериды, которые образуют основной компонент жирового тела, в форме липидных капель [25–27]. Содержание триглицеридов в жировом теле взрослых особей T. castaneum после семидневного голодания составило 0,4 ± 0,2 мкг/мг белка. Напротив, содержание триглицеридов в жировом теле составляло 9,7 ± 1,7 мкг/мг белка, когда T. castaneum скармливали пшеничной муке. Пищевая депривация привела к потере триглицеридов из жирового тела Т. castaneum (рис. 4А). После семидневного голодания особям T. castaneum в течение 48 часов давали гипс с дозировкой 200 мМ маннитола или в отсутствие органических соединений. Содержание триглицеридов в жировом теле составляло 0,2 ± 0,1 мкг/мг белка при скармливании T. castaneum гипса без органических соединений. Содержание триглицеридов в жировом теле составляло 8,6 ± 1,0 мкг/мг белка, когда T. castaneum скармливали гипсу с маннитом (рис. 4В). Эти результаты показывают, что кормление жуков гипсом с добавлением 200 мМ маннита приводило к повышению уровня содержания триглицеридов в жировом теле по сравнению с контролем.

10.1371/journal.pone.0207497.g004Рис. 4 Количественное определение триглицеридов в жировом теле взрослых особей T. castaneum.

Взрослые особи Tribolium castaneum голодали в течение недели, чтобы улучшить пищевое поведение. Столбики погрешностей показывают С.Д. Представленный результат является репрезентативным для нескольких отдельных экспериментов, показанных в виде прямоугольной диаграммы (n = 4; самое высокое значение, верхний квартиль, медиана, нижний квартиль и самое низкое значение). Взрослых особей T. castaneum препарировали в стерилизованном PBS с помощью пинцета, а жировые тела (FB) собирали в микроцентрифужные пробирки.(A) «Недоедающие» — это результаты, полученные для взрослых особей T. castaneum после голодания в течение недели, «кормление» означает, что взрослых особей T. castaneum кормили обычной пищей, цельнозерновой мукой, содержащей 5% дрожжей. Статистическую значимость определяли с помощью U-критерия Манна-Уитни (*, P = 0,0286). (B) Взрослые особи T. castaneum получали гипс с добавлением 200 мМ маннита или без углеводов (только вода) в течение 48 часов. Статистическую значимость определяли с помощью U-критерия Манна-Уитни (*, P = 0,0286).

Резюме данных RNA-Seq

Чтобы выяснить, зависит ли экспрессия генов от условий кормления маннитом, были получены транскриптомные данные с использованием RNA-seq. В этом исследовании два типа библиотек последовательностей кДНК были сконструированы с использованием 20 взрослых особей T. castaneum (соотношение полов: 1:1), выращенных без углеводов (C), которым давали гипс только с водой или кормили гипсом с добавлением 200 мМ маннита ( м) соответственно. Всего в каждом образце было сгенерировано 25 203 990 необработанных ридов для безуглеводных и 25 708 420 необработанных ридов для маннитола.После удаления ридов, содержащих адаптеры, и некачественных ридов из необработанных данных были получены чистые риды (таблица S2). Были получены частота ошибок, Q20, Q30 и содержание GC чистых прочтений, в результате чего было получено 24 744 966 (C) и 24 303 030 (M) чистых прочтений. Используя TopHat v2.0.12, 57,09% от общего числа прочтений для M и 55,82% для C были сопоставлены с эталонным геномом T. castaneum соответственно. Как правило, это число должно быть больше 70% при отсутствии загрязнения и выборе правильного эталонного генома.Было обнаружено, что некартированные чтения кодируют гены пшеницы, несмотря на то, что взрослые особи не питаются этими растениями (IDRA ID: DRA007274). Прочтения были удалены перед выполнением дальнейших анализов. Затем статистические результаты показали, что процент прочтений, сопоставленных с эталонными экзонами генома, составил 97,3% для маннита (M) и 96,8% для безуглеводного состояния (C) (таблица S3).

Транскрипты, индуцированные маннитолом

Для DEGSeq без биологических повторов перед дифференциальным анализом экспрессии генов для каждой секвенированной библиотеки количество прочтений корректировали с помощью программного пакета edgeR с одним коэффициентом нормализации масштабирования.Программное обеспечение DEGSeq использовалось для проведения дифференциального анализа экспрессии генов между T. castaneum, не содержащими углеводов, и T. castaneum, питавшимися маннитом; порог был установлен на обычном уровне padj < 0,05 [28]. Средние чтения мРНК были нормализованы к значениям FPKM. Сравнение значений FPKM между M (с маннитом) и C (без углеводов) показало относительно более высокий уровень экспрессии мРНК в условиях с маннитом. Распределение плотности (рис. 5А) и диаграмма скрипки (рис. 5В) FPKM визуально демонстрируют уровни экспрессии генов.Графики вулканов использовались для вывода об общем распределении дифференциально экспрессируемых генов (рис. 5C). Порог обычно устанавливался следующим образом: |log2(Fold Change)| > 1 и значение q < 0,005. Двадцать восемь генов были активизированы для M по сравнению с C, тогда как 27 генов были подавлены (рис. 5C). Эти результаты показывают, что даже после кормления маннитом большинство генов T. castaneum малоэффективны по сравнению с их эффектами в условиях отсутствия углеводов. Дифференциально экспрессируемые гены с повышенной экспрессией показаны в таблице 1, а гены с пониженной экспрессией — в таблице S4 с аннотацией генной онтологии (GO).Кроме того, анализ путей KEGG дифференциально экспрессируемых генов дал важную информацию о потенциальных биологических путях, активируемых в ответ на кормление маннитом. Активированные гены принадлежат к различным функциональным категориям, таким как синтез жирных кислот, метаболизм пирувата, стрессовые белки и метаболизм углеводов (рис. S1–S5). Кормление маннитом позволило взрослым особям T. castaneum увеличить продолжительность жизни по сравнению с таковой у взрослых особей, получавших безуглеводный гипс (рис. 1В). Результаты показали, что увеличенная продолжительность жизни была обеспечена активированными генами, связанными с метаболизмом источников пищи, обеспечивающих энергию, таких как жирные кислоты и углеводы.

10.1371/journal.pone.0207497.g005Рис. 5 Сравнение значений FPKM в условиях с маннитом и без углеводов.

M, взрослые особи T. castaneum получали гипс с добавлением 200 мМ маннита в течение 48 часов; Взрослых особей C, T. castaneum кормили гипсом без углеводов в течение 48 часов. (A) Распределение плотности ФПКМ. По оси X показан log10(FPKM+1), а по оси Y показана плотность генов. (B) ФПКМ скрипка Сюжет. По оси X показаны имена образцов, а по оси Y — log10 (FPKM+1). Каждая скрипка имеет пять статистических величин (максимальное значение, верхний квартиль, медиана, нижний квартиль и минимальное значение).Ширина скрипки показывает плотность генов. (C) Ось x показывает кратное изменение экспрессии генов между разными образцами, а ось y отображает статистическую значимость различий. Гены, регулируемые значительно вверх и вниз, выделены красным и зеленым цветом соответственно. Синим цветом показаны гены, экспрессия которых не отличалась между группой лечения и контрольной группой.

10.1371/journal.pone.0207497.t001Table 1 Активированные гены.
ID гена журнал2.Свернуть_изменить. значение р Термин GO
663216 1,8634 9.09Е-16 альфа-кристаллин А цепь
660272 1.8311 3.01Е-23 транс-1%2C2-дигидробензол-1%2C2-диолдегидрогеназа
657759 1,7849 4.24E-08 тимидилатсинтаза
663240 1,7699 5. 92Е-18 белок летальный(2)необходим для жизни
660669 1,7566 7.87E-10 предшественник катепсина L
100142317 1,7551 3.00E-11 белок теплового шока 68a
660153 1,7446 2.18Е-12 белок летальный(2)необходим для жизни
100142517 1,651 3.46Е-18 белок теплового шока 68b
103312428 1.5694 8.79Е-12 белок, содержащий повторы, богатые лейцином 15
662237 1,5234 1. 46Е-15 белок летальный(2)необходим для жизни
663954 1.5018 8.38E-05 альфа-амилаза
657939 1.4611 3.46Е-18 Z9 ацил-КоА-десатураза B
658103 1.4169 1.12Е-30 Z9 ацил-КоА-десатураза А
103314884 1.3526 2.58Е-67 синтаза жирных кислот
663483 1.3516 8.87Е-44 белок, связанный с патогенезом 5
663852 1.3382 1.66E-06 митохондриальный натрий/водородный обменник 9B2%2C вариант транскрипта X4
661282 1,2667 3. 95Е-05 цитохром Р450 9АВ1
660916 1.2532 2.07Е-07 богатый пролином экстензиноподобный белок EPR1
662620 1.2095 9.48E-08 гексамерин 5
659356 1.1292 1.27Е-07 альфа-трегалозо-фосфатсинтаза
100142345 1.1227 1.00E-16 предполагаемый неохарактеризованный белок ART2
661091 1.0655 1.33Е-23 сорбитолдегидрогеназа
661777 1.0511 1. 52Е-06 неохарактеризованный вариант транскрипта LOC661777%2C X1
103314314 1.0462 1.06Е-18 брачурин
655734 1.0423 5.33Е-34 трансферрин
660776 1.0402 1.24E-08 предполагаемый трикарбоксилатный транспортный белок%2C митохондриальный
656728 1.0237 1.87Е-16 АТФ-цитратсинтаза%2C вариант транскрипта X1
658362 1,021 6.51Е-25 вариант транскрипта ацетил-КоА-карбоксилазы%2C X6
Проверка уровней экспрессии транскриптов с помощью количественной ОТ-ПЦР

Для подтверждения профилей экспрессии мРНК с помощью RNA-Seq чувствительные к манниту гены, связанные с синтезом жирных кислот и синтезом трегалозы, были проанализированы с помощью количественной ОТ-ПЦР (рис. 6).Идентификаторами генов были TC011522, кодирующий синтазу жирных кислот, и TC007883, кодирующий альфа-трегалозо-фосфатсинтазу, соответственно. Сходные паттерны экспрессии обоих генов также были получены с помощью количественной ОТ-ПЦР, что подтвердило воспроизводимость данных экспрессии генов в этом исследовании.

10.1371/journal.pone.0207497.g006Рис. 6 Проверка генов, чувствительных к манниту, с помощью количественной ОТ-ПЦР.

Относительные уровни экспрессии генов-кандидатов метаболизма маннита определяли с помощью количественной ОТ-ПЦР.TC011522, синтаза жирных кислот; TC007883, альфа-трегалозо-фосфатсинтаза. Относительную экспрессию рассчитывали по методу 2-ΔΔCt. Рибосомный белок S3 (RpS3) T. castaneum использовали в качестве контроля для нормализации количества матриц. Столбики погрешностей показывают SEM (n = 3). Статистическую значимость определяли с помощью t-критерия (***, P = 0,001 для TC011522; P = 0,0002 для TC007883).

Обсуждение

Это исследование показывает, что маннит, способствующий пищевому поведению взрослых особей T. castaneum, действует как источник питательных веществ.

До сих пор оставалось неясным, использует ли T. castaneum маннит в качестве питательного вещества. Продолжительность жизни T. castaneum, получавших диету из гипса с добавлением маннита в качестве единственного источника углерода, была увеличена по сравнению с продолжительностью жизни жуков, питавшихся безуглеводной гипсовой диетой (рис. 1В). Маннитол, вероятно, может обеспечить эффективное питание для взрослых особей T. castaneum. Содержание маннита в рационе явно уменьшалось после того, как гипс выводился из организма в виде отходов жизнедеятельности (рис. 2). Маннит, полученный из пищи, будет транспортироваться в гемолимфу через эпителиальные клетки кишечника, экспрессирующие переносчики.Аквапорин является переносчиком молекул воды, который также отвечает за транспорт восьми полиолов, включая маннит, через трансмембрану [29]. Несколько генов аквапоринов экспрессировались в кишечнике T. castaneum [30], что, возможно, позволяло аквапорину транспортировать маннит из полости кишечника в гемолимфу. После скармливания маннита гемолимфа взрослых особей T. castaneum не содержала маннита. Скорее, трегалоза была обнаружена в гемолимфе, несмотря на присутствие маннита в рационе (рис. 3А), что указывает на то, что маннит, возможно, метаболизируется в трегалозу.Когда взрослых особей T. castaneum кормили гипсом без углеводов (т. е. только водой), в гемолимфе не обнаруживались сахара, за исключением небольшого количества глюкозы. Эти результаты свидетельствуют о том, что почти все сахара гемолимфы потреблялись в качестве источника углерода в периоды голодания, что было необходимо для активности до анализа потребления с пищей с использованием гипса (рис. 3B). Диета, содержащая маннит, привела к увеличению содержания трегалозы в гемолимфе взрослых особей T. castaneum (рис. 3А).

Трегалоза, невосстанавливающий дисахарид, состоящий из двух молекул глюкозы с α-1,1-гликозидной связью, синтезируется в жировом теле [31, 32].Трегалоза экспортируется через облегченный транспортер трегалозы TRET1 в гемолимфу [33] и, таким образом, является основным сахаром гемолимфы у многих насекомых [31]. Синтезу трегалозы у насекомых способствуют два ключевых фермента: трегалозо-6-фосфатсинтаза (TPS, EC 2.4.1.15) и трегалозо-6-фосфатфосфатаза (TPP, EC 3.1.3.12). TPS катализирует превращение УДФ-глюкозы и глюкозо-6-фосфата (G6P) в трегалозо-6-фосфат (T6P). Затем TPP катализирует дефосфорилирование T6P до трегалозы [32]. Ген TPP отсутствует в базе данных генома T.castaneum, указывая на то, что этот жук имеет только один ген TPS, который может синтезировать трегалозу, только действуя как бифункциональный фермент, управляющий как TPS, так и TPP [18, 34]. Ген TPS активировался маннитом в рационе (таблица 1 и рис. 6), что свидетельствует о том, что он будет способствовать переходу от маннита к трегалозе, в то время как гликоген, полисахарид, накапливающийся в виде запаса углеводов в жировом теле, не обнаруживался при колориметрическом анализе. (файл S1). Гены, связанные с синтезом гликогена, не активировались маннитолом в рационе.Гликоген расщепляется некоторыми ферментами, такими как гликогенфосфорилаза, глюкофосфатаза и УДФ-глюкоза-пирофосфорилаза, до УДФ-глюкозы и Г6Ф, что приводит к усилению продукции трегалозы [35, 36]. Потребление маннита взрослыми T. castaneum увеличивало экспрессию TPS и, таким образом, может не ускорять путь к синтезу гликогена.

Некоторые пищевые углеводы трансформировались не только в трегалозу и гликоген, но и в липиды как основной компонент жирового тела. У насекомых более 90% запасенных липидов составляют триглицериды [37, 38].Жирные кислоты быстро поглощаются жировым телом и легко включаются в триглицериды, которые используются для производства энергии посредством β-окисления [38, 39]. Скорость синтеза жирных кислот значительно увеличивалась при сахарной диете, но не при добавлении крахмала [40]. В этом исследовании также было обнаружено, что путь синтеза жирных кислот активируется диетой, содержащей маннит, по сравнению с диетой, не содержащей углеводов (таблица 1). Кроме того, уровень триглицеридов в жировых отложениях был заметно увеличен за счет маннита в рационе (рис. 4В), что указывает на то, что маннит, поглощенный организмом, будет переведен в хранилище в виде триглицеридов. Содержание триглицеридов сохранялось, когда жуков кормили пшеничной мукой, тогда как, подобно трегалозе в гемолимфе, оно заметно снижалось в условиях голодания (рис. 4А). Эти результаты свидетельствуют о том, что триглицерид, хранящийся в качестве энергетического запаса в жировом теле, в основном потреблялся в периоды голодания для обеспечения материала для производства таких продуктов, как АТФ, и начал восстанавливаться при приеме маннита. У дрозофилы некоторые гены, участвующие в синтезе жирных кислот, включая ацетил-КоА-карбоксилазу и АТФ-цитратлиазу, активировались, когда в рационе содержался сахар, но оставались неизменными при голодании [17].Аналогичные результаты были получены при использовании маннита (таблица 1 и рис. S2 и S3). Метаболизм T. castaneum, чувствительный к манниту, сравним с экспрессией генов, чувствительных к сахару, у дрозофилы.

У некоторых насекомых положительный эффект маннитола как питательного агента не зарегистрирован. Маннит сокращал продолжительность жизни взрослых особей Pimpla turionellae по сравнению с сахарозой в качестве типичного пищевого сахара и не позволял размножаться взрослым самкам [41]. Маннитол также действует как ядовитый агент для самок дрозофилы, потому что он заметно сокращает их продолжительность жизни, а не является питательным [42]. Если этот негативный физиологический эффект маннита будет наблюдаться у взрослых самок T. castaneum, его можно будет использовать в качестве пестицида-приманки для этого жука. Однако маннит не ядовит, а питателен для T. castaneum. Следовательно, будет трудно использовать маннит в качестве инсектицида-приманки для борьбы с вредителями.

Хотя это исследование путем анализа профилей экспрессии генов, чувствительных к манниту, с использованием RNA-Seq, показало, что маннит действительно используется T.castaneum, возник еще один вопрос, а именно, как маннит метаболизируется в другие углеводы. На самом деле ферменты, связанные с катализом маннита до фруктозы и/или маннит-1-фосфата, до сих пор неизвестны в базе данных KEGG (S1 Fig). Учитывая, что трегалоза и триглицерид увеличиваются при приеме маннитола, маннит должен метаболизироваться в другие углеводы. Одним из возможных путей является путь с участием сорбитолдегидрогеназы (SDH, EC 1.1.1.14), фермента, превращающего сорбит полиолов во фруктозу, который также может участвовать в метаболизме маннита.СДГ катализирует маннит, изомер сорбита, с еще более низкой активностью, чем сорбит [43, 44]. В качестве другой возможности катализу маннита способствует NADP + -зависимая D-арабитолдегидрогеназа. Арабитолдегидрогеназа была идентифицирована у ржавчинного гриба Uromyces fabae [45]. Высоко гомологичные гены (идентификатор гена: LOC656777, LOC656868 и LOC656956) были извлечены из генома T. castaneum с помощью анализа BLAST, что указывает на то, что эти гены могут кодировать метаболизм маннита, как у ржавчинного гриба.Для проверки этих гипотез необходимы дальнейшие исследования метаболизма маннита у T. castaneum.

Физико-химические свойства, токсичность in vitro и визуализирующие исследования in vivo

Наноматериалы 2021, 11, 2234 24 из 25

26. Zhang, Y.; Чен, Б. ; Сюй, С .; Ли, Х .; Чжан, Дж.; Сан, Дж.; Чжэн, Х .; Тонг, Л.; Суй, Г.; Чжун, Х .; Ся, Х .; Хуа, Р. Наночастицы NaYF4:Er3+/[email protected]:Tm3+/Yb3+ с двойным функционированием

в качестве нанокалориферов и нанотермометров для современной фототермальной терапии.науч. 2017, 7, 11849–11849.

27. Рябая О.; Прокофьева, А.; Акасов Р.; Хоченков Д.; Емельянова, М.; Буров, С .; Марквичева, Е.; Иншаков, А.; Степанова,

E. Метформин повышает противоопухолевую активность ингибитора МЕК биниметиниба в 2D и 3D моделях клеток метастатической меланомы человека

. Биомед. Фармацевт. 2018, 109, 2548–2560.

28. Мукерджи, А.; Вишванатха, Дж.К. Составление, характеристика и оценка наносфер PLGA, нагруженных куркумином, для терапии рака.Противораковый Рез. 2009, 29, 3867–3875.

29. Ли Г.; Парк, Ю.И. Наноносители с повышающей конверсией, легированные лантанидами, для доставки лекарств и генов. Наноматериалы 2018, 8, 511.

30. Пака Г.Д.; Ramassamy, C. Оптимизация куркумин-нагруженных наночастиц PEG-PLGA путем функционализации GSH: исследование

пути интернализации в нейронных клетках. Мол. Фармацевтика 2016, 14, 93–106.

31. Сампат, М.; Balasubramanian, S. Нагруженные рифампицином микросферы поли(молочной-со-гликолевой) кислоты: синтез, характеристика, доставка

и их антимикробные исследования.Дж. Бионаноски. 2011, 5, 47–52.

32. Сингх Р.; Лиллард, Дж. В., младший. Адресная доставка лекарств на основе наночастиц. Эксп. Мол. Патология. 2009, 86, 215–223.

33. Сайяр З.; Мальмири, Х. Дж. Получение, характеристика и оценка нанодисперсий куркумина с использованием трех различных методов

— новых докритических условий воды, спонтанного эмульгирования и вытеснения растворителя. Zeitschrift für

Physikalische Chemie 2019, 233, 1485–1502.

34.Манмод, А. Получение и характеристика наночастиц PLGA, загруженных мезеламином. Междунар. Дж. Фарм. фарм. науч. 2011, 2,

208–214.

35. Ван, К.; Ма, С .; Ву, З .; Лян, Х .; Ян, П .; Песня, Дж.; Человек.; Чжао, Q. Повышенная биодоступность и противоопухолевый эффект электропряденого нановолокна с нагрузкой curcu-

мин: исследование in vitro и in vivo. Наномасштаб Res. лат. 2015, 10, 439.

36. Камаль М.; Наззал, С. Разработка нового класса самоэмульгирующихся систем доставки лекарств с использованием сульфорафана (SFN-

SEDDS) с помощью скрининга с высокой пропускной способностью: тематическое исследование с куркумином.Междунар. Дж. Фарм. 2018, 539, 147–156.

37. Маркович З.; Прекодравац, Дж.; Тошич, Д.; Холклайтнер-Антунович, И.; Милосавлевич, М.; Драмиканин, М.; Маркович, Б.Т. Легкая син-

диссертация о водорастворимых нанокристаллах куркумина. Ж. Серб. хим. соц. 2015, 80, 63–72.

38. Клиер, Д.Т.; Кумке, М.Ю. Анализ влияния кристаллической структуры на ап-конверсионную люминесценцию в наноматериалах NaYF4

, легированных Yb3+,Er3+. Дж. Матер. хим. C 2015, 3, 11228–11238.

39.Ассаауди, Х .; Шан, Г.-Б.; Дайк, Северная Каролина; Демопулос, Г.П. Индуцированное отжигом сверхэффективное преобразование NIR в VIS нано-

/микроразмерных кристаллов α и β NaYF4:Er3+,Yb3+. CrystEngComm 2013, 15, 4739–4746.

40. Вильгельм С.; Хирш, Т .; Паттерсон, В.М.; Шойхер, Э.; Майр, Т .; Вольфбейс, О.С. Многоцветные наночастицы с повышающей конверсией для конъюгации белков

. Тераностика 2013, 3, 239–248.

41. Йи, Г.С.; Чоу, Г.М. Синтез нанокристаллов гексагональной фазы NaYF4:Yb,Er и NaYF4:Yb,Tm с эффективной повышающей конверсией

Флуоресценция.Доп. Функц. Матер. 2006, 16, 2324–2329.

42. Бай, X.; Сюй, С .; Лю, Дж.; Ван, Л. Люминесцентное отслеживание доставки генов с помощью многофункциональных нанокапсул. Таланта

2016, 150, 118–124.

43. Дас Г.К.; Старк, Д.Т.; Кеннеди, И. М. Потенциальная токсичность повышающих преобразование наночастиц, инкапсулированных с бислоем, образованным

путем притяжения лиганда. Ленгмюр 2014, 30, 8167–8176.

44. Ли, З.К.; Чжан, Ю .; Цзян, С. Многоцветные флуоресцентные наночастицы со структурой ядра/оболочки с повышающей конверсией.Доп. Матер. 2009, 21,

doi:10.1002/adma.2009.

45. Ши, Л.; Ху, Дж.; Ву, Х .; Жан, С .; Ху, С.; Тан, З .; Чен, М .; Лю, Ю. Наночастицы ядра/оболочки с повышением частоты с пониженной поверхностью

тушение для обнаружения флуоресценции ионов Hg2+. Далтон Транс. 2018, 47, 16445–16452.

46. Диас, Л.Д.; Бланко, KC; Мфуо-Тинга, И.С.; Инада, Нью-Мексико; Баньято, В.С. Куркумин как фотосенсибилизатор: от молекулярной структуры

до последних достижений в антимикробной фотодинамической терапии.Дж. Фотохим. Фотобиол. С: Фотохим. 2020, 45, 100384.

47. Казанцис, К.; Кутсониколи, К.; Мавроиди, Б.; Захариадис, М.; Алексиу, П.; Пелекану, М .; Политопулос, К.; Александрату, Э .;

Sagnou, M. Производные куркумина в качестве фотосенсибилизаторов в фотодинамической терапии: фотофизические свойства и исследования in vitro

с клетками рака предстательной железы. Фотохим. Фотобиол. науч. 2020, 19, 193–206, doi: 10.1039/c9pp00375d.

48. Дев А.; Шривастава, А.К.; Чоудхури, С.Р.; Кармакар, С. Нано-куркумин влияет на фотодинамическую терапию синим светом для восстановления роста стволовых клеток глиобластомы. RSC Adv. 2016, 6, 95165–95168, doi:10.1039/C6RA20269A.

49. Лейте Д.П.В.; Паолильо, FR; Пармезано, Теннесси; Фонтана, CR; Баньято, В.С. Эффекты фотодинамической терапии с синим светом и куркумином

в качестве полоскания рта для оральной дезинфекции: рандомизированное контролируемое исследование. Фотомед. Лазерная сург. 2014, 32, 627–632,

doi:10.1089/фо.2014.3805.

50. Simões, J.C.S.; Сарпаки, С.; Пападимитрулас, П.; Терриен, Б .; Лоудос, Г. Конъюгированные фотосенсибилизаторы для визуализации и ФДТ в исследовании рака

. Дж. Мед. хим. 2020, 63, 14119–14150, doi:10.1021/acs.jmedchem.0c00047.

51. Дас, А.; Багот, CC; Раппепорт, Э.; Тис, Т.Б.; Парк, В. Количественное моделирование и экспериментальная проверка резонансного переноса энергии Фёрстера

в биосенсорах на основе наночастиц с повышением частоты. Дж. Заявл. физ. 2021, 130, 023102, дои: 10.1063/5.0053.

52. Е, Ю.; Ли, Ю .; Fang, F. Конверсионные наночастицы, конъюгированные с куркумином, в качестве фотосенсибилизатора для ингибирования устойчивых к метициллину

Staphylococcus aureus в легких под ближним инфракрасным светом. Междунар. Дж. Наномед. 2014, 9, 5157–5165.

53. Шахчераги С.Х.; Занги, М .; Лотфи, М .; Гайур-Мобархан, М.; Горбани, А .; Джалиани, Х.З.; Садегния, Х.Р.; Сахебкар, А.

Терапевтический потенциал куркумина при лечении мультиформной глиобластомы.Курс. фарм. Дес. 2019, 25, 333–342,

doi:10.2174/13816128256661123704.

American Adventure 2008 Нашивка на ткани Значок бойскаутов Скаутинг L5K G Коллекционирование Коллекционирование и искусство

American Adventure 2008 Нашивка на ткани Бойскауты Скаутинг L5K G Предметы коллекционирования Предметы коллекционирования и искусство
  1. Главная
  2. Предметы коллекционирования Предметы искусства Коллекционные памятные вещи
  3. Лучшие категории месяца

    Портативный горшок 2 в 1
    Детское сиденье для унитаза

    Специальная цена
    Ограниченное количество


    Плюшевый танцующий кактус

    Поющий и говорящий

    Скидка 33% Скидка

    Нашивка на ткань American Adventure 2008 Бойскауты Скаутинг L5K G



    НАСЛАЖДАЙТЕСЬ СТИЛЕМ И КОМФОРТОМ: поклонники Fighting Camels: когда придет время вернуться в школу и купить одежду, с яркими узорами, чтобы вы не чувствовали себя однообразными.Персонализированная багажная бирка Математический класс Декор Я люблю математическую тему Объекты Значок сердца Калькулятор Компас Линейка Легко носить с собой Многоцветный W2. вы можете купить продукцию высокого качества. Можно также использовать как тарелку для супа с ручкой, Универсально подходит для обхвата запястья 4, Продается в упаковке по 8 подвесок, Можно использовать как семейную реликвию, Ваш ЩЕНОК будет выглядеть таким милым и ВОСХИТИТЕЛЬНЫМ, Наш широкий выбор доступен для бесплатной доставки и бесплатный возврат. Шерстяная шапка Beanies: покупайте Skullies & Beanies ведущих модных брендов в ✓ БЕСПЛАТНАЯ ДОСТАВКА и возврат соответствующих покупок.Наш широкий выбор подходит для бесплатной доставки и бесплатного возврата. Купите женские джинсы скинни до щиколотки Bella с высокой посадкой Joe’s Jeans: покупайте джинсы ведущих модных брендов в ✓ БЕСПЛАТНАЯ ДОСТАВКА. Возможен возврат соответствующих покупок. Увидите разницу сами. Подходит для: Honda CBR 1000 RR — средний 2008 — 2008/2017; Honda CBR 1000 RR — средний 2008 — 2008/2017. Технология S, позволяющая получить идеальную гравированную ручку переключения передач без покраски. Говорят, что она приносит радость и гармонию в пространство, а также способствует расслаблению. Легко наносится и поставляется с простыми инструкциями по применению, Earring Closure:Post & Push Back. Один размер: Спорт и отдых на открытом воздухе, Американское приключение 2008 Значок нашивки на ткани Бойскауты L5K G, изготовленные на заказ погодостойкие виниловые баннерные знаки Дворовые баннеры Поднимите свои рекламные усилия на новый уровень с нашим сверхмощным виниловым баннером. Подвеска из окисленного кленового листа из стерлингового серебра: одежда, и озоновая базовая нота свежей зелени. Вы можете прикрепить его практически в любом месте. Бедняга Сэм в основном хранился на складе все эти годы. Эти яркие изделия добавят марокканскую богемную атмосферу в ваш дом. Кружевной край выглядит так, как будто кружево выдувное стекло, а затем оно имеет уникальную оборку, придающую ему отчетливый красивый вид, Некоторые из наших бусин путешествовали по крайней мере по трем континентам и украшали их. Этот список относится к набору стеганых одеял с изображением Микки Мауса, обсидиановые иглы — это естественный перелом, а жирафы все на своих собственных фотографиях, поэтому вы можете разместить их где угодно. торт.Занавес изготовлен из белого полиэстера, окрашенного вручную. Сроки доставки для стандартной доставки — после размещения заказа — приблизительные, Два браслета из стерлингового серебра и янтаря, *** Стоимость доставки зависит от места назначения и веса сумки. Все резьбонарезы поставляются с силиконовыми застежками для сережек. Это устраняет любые складки или морщины в материале обшивки потолка и дает гораздо лучший конечный результат для вашего автомобиля. Эта забавная и очень правдоподобная настенная наклейка отлично подходит для уголка для чтения или книголюба.другие будут возвращены немедленно. Все рисунки также могут быть напечатаны на футболках для детей старшего возраста. Американское приключение 2008 Бойскауты нашивки на ткани Знак разведки L5K G. Нужны размеры, отличные от перечисленных. com — увеличенные эскизы и дополнительная информация об этом наборе. Дата первого перечисления: 30 августа. Купить спортивные штаны Aeropostale Womens Aero NYC Jogger большого размера Aqua и другие активные штаны можно по адресу: нижнее белье колготок с открытой оболочкой позволяет вам выглядеть более сексуально и модно. Гибкая деревянная лента, отшлифованная до совершенства.Пожалуйста, не стесняйтесь обращаться к нам, если у вас есть какие-либо вопросы, надежный источник стильной мебели, который включает в себя 3 крепления, подходящие для любой ситуации: зажим для вентиляционного отверстия, купить ночной свет с 3D-оптической иллюзией — 7 светодиодов, меняющих цвет лампы — Cool Soft Light Safe для детей — Решение от ночных кошмаров — Бабочка: лампы и освещение — ✓ БЕСПЛАТНАЯ ДОСТАВКА возможна для соответствующих покупок, Samsung Galaxy S8/S8+/Note 9/Note 8, может стать идеальным подарком зимой. гладкая поверхность делает скольжение в труднодоступных местах очень полезным, компактным и легким всего за 3.Гарантия производителя не действует. Вы можете держать его в руке или положить в сумку. Наши зажимы для денег из монохроматической стали имеют классический стиль и превосходное качество. Крышка из закаленного стекла с паровым клапаном устойчива к духовке до 40 градусов по Фаренгейту. Витрина Fsmiling для более изящных ожерелий, USB-разъем Mini-B, который также был размещен на плате, значок American Adventure 2008 с тканевой нашивкой Boy Scouting L5K G, совместимость с разъемом для наушников 5 мм.

    Нашивка на ткань American Adventure 2008 Бойскауты Scouting L5K G

    Scouting L5K G American Adventure 2008 Нашивка на ткани Бойскауты, Скауты Scouting L5K G American Adventure 2008 Нашивка на ткани Boy, Состояние: выглядит неиспользованным, онлайн Лучший выбор, качество обслуживания, доставка по всему миру, Купите наш лучший бренд онлайн, Бесплатная доставка ! Наш интернет-бутик., American Adventure 2008 тканевая нашивка для бойскаутов Scouting L5K G.


    more-xel.ru — Обратный поиск домена

    more-xel.ru — Обратный поиск домена — AskDNS АскДНС ☰

    Сведения о домене

    IP-адрес:

    Соседи:

    93

    Whois:

    Последнее обновление:

    18.03.2022

    IP-соседи

    Показано 93 из 93 записей

    Имя домена

    Последнее обновление

    11.03.2022

    11. 03.2022

    11.03.2022

    12.03.2022

    12.03.2022

    12.03.2022

    12.03.2022

    13.03.2022

    13.03.2022

    13.03.2022

    14.03.2022

    14.03.2022

    14.03.2022

    14.03.2022

    14.03.2022

    11.03.2022

    13.03.2022

    17.03.2022

    11.03.2022

    11.03.2022

    11.03.2022

    11.03.2022

    16.03.2022

    17.03.2022

    11.03.2022

    18.03.2022

    18.03.2022

    18.03.2022

    13.03.2022

    13.03.2022

    16.03.2022

    16.03.2022

    12.03.2022

    12.03.2022

    13.03.2022

    14.03.2022

    13.03.2022

    12.03.2022

    13.03.2022

    14.03.2022

    12.03.2022

    12.03.2022

    12.03.2022

    18.03.2022

    18.03.2022

    11.03.2022

    10.03.2022

    11. 03.2022

    14.03.2022

    16.03.2022

    17.03.2022

    14.03.2022

    16.03.2022

    10.03.2022

    10.03.2022

    17.03.2022

    10.03.2022

    12.03.2022

    12.03.2022

    10.03.2022

    10.03.2022

    10.03.2022

    10.03.2022

    11.03.2022

    11.03.2022

    12.03.2022

    12.03.2022

    12.03.2022

    12.03.2022

    12.03.2022

    12.03.2022

    12.03.2022

    12.03.2022

    13.03.2022

    13.03.2022

    13.03.2022

    14.03.2022

    14.03.2022

    14.03.2022

    14.03.2022

    14.03.2022

    15.03.2022

    16.03.2022

    17.03.2022

    17.03.2022

    18.03.2022

    18.03.2022

    2022-03-19

    20.03.2022

    10.03.2022

    11.03.2022

    13.03.2022

    12.03.2022

    Условия использования · Политика конфиденциальности · Связаться с нами

    © 2020 AskDNS.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован.